細胞培養(yǎng)的操作過程

發(fā)布時間： 2022-05-23　　點擊次數(shù)： 1941次

　　細胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細胞培養(yǎng)都是一個不可少的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺?。細胞培養(yǎng)，既包括微生物細胞的培養(yǎng)，也包擴細胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)不可少的環(huán)節(jié)，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。通過細胞培養(yǎng)得到大量的細胞或其代謝產(chǎn)物。因為生物產(chǎn)品都是從細胞得來，所以可以說細胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中最核心、最基礎(chǔ)的技術(shù)。

　　細胞培養(yǎng)操作過程：

　　注意無菌。無論哪一管液體，開蓋后盡量立即關(guān)上（如果有幾瓶都需要開的，也注意，可以虛蓋）。蓋子向上放。操作時不要從開蓋的容器上方經(jīng)過。另外，無菌臺面上擺放的各種東西，最好是一字擺開，平行于自己。盡量不要前后重疊。

　　細胞操作中所用的所有耗材試劑最好都是細胞培養(yǎng)專用。一般都以一次性耗材居多。1ML槍頭為加長型專用培養(yǎng)槍頭。移液管亦有專用10mL一次性無菌移液管

　?。?）細胞換液：

　　培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液，加入新培養(yǎng)液。

　?。?）細胞傳代：

　　傳代之前先觀察，細胞是否密集，是否開始融合。一般融合達到70－80%就可以傳代。早點傳代也可以。

　　如果是貼壁生長的細胞：

　　1）培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液；

　　2）無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次（按培養(yǎng)體積加入）；

　　3）加入適量胰酶消化適當時間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，一次加入1mL胰酶。消化時間視細胞類型等多種情況綜合考慮，一般如果是細胞株，非原代培養(yǎng)，消化1－2分鐘足矣）；

　　4）用槍頭吹打數(shù)十次（視細胞類型而定。一般細胞株30－50次吧，耗時一般2分鐘左右）；

　　5）加入適量體積*培養(yǎng)基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，可以加入1mL*培養(yǎng)基；現(xiàn)在培養(yǎng)瓶（皿）里有2mL溶液）。

　　6）現(xiàn)在可以將溶液進行分瓶（2mL）。如果是細胞株，直接均分到兩個培養(yǎng)瓶（皿）里。如果是原代培養(yǎng)，可以根據(jù)消化時間來對細胞進行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶（皿）。

　　7）將兩個培養(yǎng)瓶（皿）補足*培養(yǎng)基到正常體積（果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，為5mL*培養(yǎng)液）

　　8）鏡下觀察。剛剛傳代細胞還沒貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內(nèi)會貼壁，如果已經(jīng)貼壁，根據(jù)細胞類型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。

　　9）鏡下觀察無誤之后，再放入細胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。

　　10）傳代之后，最好第二天細胞換液一次。當然，也可以視情況而定。

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